Molecular biology as a diagnostic tool for detection of Leptospira spp. in cows of a border region ­ case report

The reproductive efficiency of livestock is the basis for the success of livestock, dairy or beef, and having high reproductive performance depends on several factors within the production system and the presence of infectious diseases of the reproductive sphere in the herd is one of the factors that can compromise that efficiency. The aim of this study was to use molecular biology as a diagnostic tool for the detection of Leptospira spp. DNA in cows with reproductive disorders on a rural property in the municipality of Boca do Acre, Amazonas, Brazil. Vaginal mucus was collected from nine Nelore breeding cows with a history of abortion and birth of weak calves submitted to DNA extraction and nested-PCR technique for 16S gene amplification at the bacterial genus level. Of the nine samples analyzed, five (55.55%) amplified a product of 331bp. The municipality of Boca do Acre is bordered by Peru and Bolivia, and knowledge of the prevalence of the disease, serovars, and circulating Leptospira species is essential for the adoption of measures related to animal husbandry, as well as health education for ranchers and their workers to avoid a possible occupational infection since this disease is considered an important zoonosis. New molecular studies using primers that allow the identification of the Leptospira species and mainly pathogenic species should be conducted in this region in order to elucidate the possible species of this etiological agent and the possible reservoirs of the disease to begin the understanding of the epidemiology of this disease in cattle in this region of border.

Transferability of heterologous primers in Brycon falcatus

The genus Bryconcomprises fish species of significant socioeconomic and biological importance in Brazil. Despite that, the genetic knowledge about these species is scarce, especially regardingBrycon falcatus. Thus, the objective of this study was to evaluate the transferability of heterologous microsatellite primers inB. falcatus for the first time. Heterologous primers obtained from B. opalinus, B. hilarii, B. insignis, B. orbignyanus, B. amazonicus, Prochilodus argenteus, Prochilodus lineatus, Piaractus mesopotamicus, and Colossoma macropomum were evaluated. The primers that showed the best amplification patterns were applied to a sample of 22 individuals and the genetic parameters were calculated. Nine primers displayed satisfactory cross-amplification withB. falcatus: BoM5 (Brycon opalinus); Bh8, Bh13 and Bh16 (B. hilarii); Borg59 (B. orbignyanus); Bag22 (B. amazonicus); Par12 and Par80 (P. argenteus), and Cm1A8 (C. macropomum). The genetic parameters (number of alleles, effective alleles, allele richness, and expected and observed heterozygosity) and the polymorphic information content (PIC) confirmed the viability of these primers for population genetics analyses. Our study demonstrates the potential of transferability of microsatellite markers from related species and even different genera to B. falcatus, providing usefull tools for future population genetic studies in this species. (AU)

Skin antisepsis protocols for the collection of blood from donor dogs / Protocolos de antissepsia de pele para colheita de sangue de cães doadores

ABSTRACT: The objective of this study was to evaluate and compare the bactericidal efficacy of2% chlorhexidine surfactant solution + 70% alcohol and 2% chlorhexidine surfactant solution + 0.5% chlorhexidine-alcohol, and standardize skin antisepsis for blood collection from donor dogs. One hundred and twenty skin swabsof the jugular regions of 20 dogs were evaluated. Swabs were distributed into six treatment(T) groups according to the disinfectant used and removal or retention of local hair: T1involved neither antisepsisnorhair removal; T2comprised 2% chlorhexidine + 0.5% chlorhexidine-alcoholwithout hair removal;T3 comprised 2% chlorhexidine + 70% alcohol without hair removal; T4comprised hair removal but no antisepsis;T5comprised 2% chlorhexidine + 0.5% chlorhexidine-alcohol withhair removal; and T6comprised 2% chlorhexidine + 70% alcohol with hair removal. Antiseptic agents were continuously applied in a single direction for a total of 3 min. Use of antiseptics was effective with or without hair removal, resulting in the absence of bacterial growth. Complete efficacy of the technique used in this study may have been due to the increased antiseptic application time. In conclusion,the antisepsis protocols tested in this study can be safely used for the collection of blood from dogs; although,removal of hair prior to antisepsis is still recommended.

RESUMO: O objetivo deste estudo foi avaliar e comparar o potencial de redução bacteriana proporcionado peloclorexidinadegermante 2% + álcool 70% eclorexidinadegermante 2% + clorexidinaalcoolica 0,5% e padronizar a antissepsia de pele para colheita de sangue de cães doadores. Foram avaliados 120 zaragatoas de pele da região da jugular de 20 cães, que foram distribuídos em seis tratamentos (T) de acordo com oagente usado para desinfecção, associado, ou não, a tricotomia local: T1 - Tratamento sem tricotomia e sem antissepsia, T2 - Tratamento clorexidinadegermante 2% + clorexidinaalcoolica 0,5% sem tricotomia, T3 - Tratamento clorexidina 2% + álcool 70% sem tricotomia, T4 - Tratamento com tricotomia e sem antissepsia, T5 - Tratamento clorexidina 2% + clorexidina alcoólica 0,5% com tricotomia, T6 - Tratamento clorexidina 2% + álcool 70% com tricotomia. A antissepsia foi feita de forma contínua em um único sentido, totalizando 3 minutos. O uso dos antissépticos se mostraram eficazes nos tratamentos com e sem tricotomia não apresentando crescimento bacteriano. A eficácia de 100% da técnica utilizada no presente trabalho pode ser decorrente do maior tempo de antissepsia. Conclui-se que os protocolos de antissepsia realizados neste estudo podem ser utilizados com segurança para a colheita de sangue de cães, embora ainda o recomendado seja a tricotomia antes da antissepsia.

Antimicrobial resistance in Staphylococcus aureus isolated from mastitis in dairy herds from the state of Minas Gerais, Brazil / Resistência a antimicrobianos em Staphylococcus aureus isolados de mastite em bovinos leiteiros de Minas Gerais, Brasil

Staphylococcus aureus (S. aureus) stands out as one of the most common etiological agents of bovine mastitis, currently causing major economic losses to dairy farming. In order to evaluate the sensitivity of this micro-organism to antimicrobials, 352 isolates from 35 dairy herds located in the state of Minas Gerais were submitted to antibiogram tests, using the disc diffusion technique. Nitrofurantoin and the Associations of neomycin, bacitracin and tetracycline (NBT), as well as penicillin, nafcillin and dihydrostreptomycin (PND), showed 100% efficiency in vitro. There were low resistance rates in the group of cephalosporins, with values of 0, 0.28 and 0.40% for cefquimona, cephalothin, and ceftiofur, respectively. Among the aminoglycosides, there was 1.69% resistance to gentamicin and 3.35% for neomycin. The highest resistance was observed for polymyxin B (82%), followed by betalactams, ampicillin and penicillin, with resistance rates of 80.92 and 80.45%, respectively. Moderate levels of resistance were observed for tetracycline, lincomycin, cefoperazone and sulfazotrim. Among the tested isolates, 65 (18.15%), coming from 24 of the 35 herds studied, showed multidrug resistance (MAR index 5; 0.2). The results pointed out to high variation in antimicrobial resistance profiles and the occcurrence of multidrug resistance among some studied strains, highlighting the importance of [...]

Staphylococcus aureus (S. aureus) destaca-se como um dos agentes etiológicos mais frequentes da mastite bovina, que causa os maiores prejuízos econômicos à pecuária leiteira brasileira. Visando avaliar o perfil de sensibilidade deste agente aos antimicrobianos, 352 isolados provenientes de 35 rebanhos leiteiros localizados em Minas Gerais foram submetidos a testes de antibiograma, utilizando-se a técnica de difusão em disco. Nitrofurantoína, bem como as associações de neomicina, bacitracina e tetraciclina (NBT) e penicilina, nafcilina e dihidroestreptomicina (PND), apresentaram 100% de eficiência in vitro. Foram verificados baixos índices de resistência no grupo das cefalosporinas, com valores de 0, 0,28 e 0,40% para cefquimona, cefalotina e ceftiofur, respectivamente. Entre os aminoglicosídeos, observou-se 1,69% de resistência para gentamicina e 3,35% para a neomicina. O maior índice de resistência foi observado para polimixina B (82%), seguido pelos betalactâmicos, ampicilina e penicilina, com índices de resistência de 80,92 e 80,45%, respectivamente. Níveis intermediários de resistência foram observados para tetraciclina, lincomicina, cefoperazona e sulfazotrim. Entre os isolados testados, 65 (18,15%), oriundos de 24 dentre os 35 rebanhos estudados, apresentaram multirresistência (índice MAR 5; 0,2). Os resultados apontaram grande variação nos perfis de resistência aos [...]

Yeast mastite outbreak in a Brazilian dairy herd / Surto de mastite causado por leveduras em um rebanho brasileiro

This study aimed to describe an outbreak of bovine mastitis caused by yeast in a dairy herd located in the state of Minas Gerais, Brazil. Microbiological analysis of milk samples (106) of the infected mammary quarters of lactating cows showed that Corynebacterium bovis (43.48%) and yeasts from the genus Candida (29.35%) were the main agents isolated in the herd. C. albicans(33.34%), C. catenulate (22.23%) and C. glabrata (18.52%) were the species most commonly isolated. The high prevalence of yeast mastitis was associated with lack of training formilkers, repetitive intramammary treatment and poor teat hygiene prior to the intramammary infusion. Appropriate management measures, specific treatment with antifungal drugs and removal of chronically infected animals were effective for the control of mastitis outbreak.

O objetivo deste estudo foi descrever um surto de mastite bovina causada por leveduras em um rebanho leiteiro localizado no Estado de Minas Gerais, Brasil. Análises microbiológicas de amostras de leite (106) dos quartos mamários infectados de vacas em lactação demonstraram que Corynebacterium bovis (43,48%) e leveduras do gênero Candida (29,35%) foram os principais agentes isolados no rebanho. C. albicans (33,34%), C. catenulata (22,23%) e C. glabrata (18,52%) foram as espécies mais comumente isoladas. A elevada prevalência da mastite por leveduras foi associada à falta de treinamento dos ordenhadores, ao tratamento intramamário repetitivo e a falhas na higienização de tetas antes da infusão intramamária. Medidas adequadas de manejo, tratamento específico com drogas antifúngicas e descarte de animais cronicamente infectados foram eficazes para o controle do surto.

Caracterização de Staphylococcus coagulase-positiva utilizando plasmas de diferentes espécies animais / Characterization of coagulase-positive Staphylococcus by using plasmas from different animal species

No presente estudo foi avaliada a eficiência de plasmas de origens leporina, bovina, equina, canina e humana na execução do teste de coagulase em cepas de Staphylococcus spp. isoladas de bovinos (n=174),de seres humanos (n=71) e de cães (n=70). As leituras dos testes foram realizadas após diferentes tempos de incubação. O plasma leporino apresentou os melhores resultados, exceto nos isolados bacterianos de cão, para os quais o plasma de equíno foi o que demonstrou os melhores resultados entre 4 e 12 horas de incubação. Nenhum isolado que tenha apresentado resultado negativo frente ao plasma leporino reagiu positivamente aos demais plasmas. Os plasmas de coelho e de cavalo foram os que revelaram os melhores resultados para os isolados bacterianos de origem humana e bovina. Verificou-se que os plasmas, quando utilizados para isolados da espécie homóloga, mostraram baixa eficiência. A coagulação do plasma leporino ocorreu em até duas horas de incubação em 92 por cento das amostras de Staphylococcus de origem bovina. De acordo com os resultados obtidos, o plasma de equino pode ser utilizado para a realização de testes de coagulase em cepas de Staphylococcus isoladas de cães, bovinos e seres humanos, com resultados semelhantes àqueles observados com o plasma leporino.

Mastites clínicas e subclínicas em bovinos leiteiros ocasionadas por Staphylococcus coagulase-negativa / Dairy cattle with clinical and subclinical mastitis caused by coagulase negative Staphylococcus

Os objetivos deste estudo foram avaliar a participação de Staphylococcus coagulase-negativa (SCN) na etiologia da mastite em rebanhos bovinos leiteiros da região sul de Minas Gerais, identificar as espécies bacterianas envolvidas e traçar os perfis de susceptibilidade destas às drogas antimicrobianas. Foram analisadas 2.492 vacas de 35 rebanhos, sob diferentes sistemas de manejo, no período de 2004 a 2008. Os índices de mastite clínica e subclínica foram de 9,87 e 52,2, respectivamente. Foram cultivadas 1.645 amostras de leite de quartos mamários individuais, e 120 cepas de SCN foram isoladas. A frequência média de isolamentos de SCN entre os rebanhos foi de 8,35, com variações de a 27,27. Observou-se grande diversidade de espécies de SCN, sendo as mais frequentes Staphylococcus hyicus (15,0), Staphylococcus chromogenes (12,5), Staphylococcus gallinarum (12,5), Staphylococcus lentus (12,) e Staphylococcus epidermidis (10,). Os testes de antibiograma apontaram que 28 dos isolados eram resistentes à penicilina, 2 à estreptomicina,1 à ampicilina e 1 à tetraciclina. Todas as amostras isoladas apresentaram 10 de sensibilidade frente a danofloxacina, enrofloxacina e florfenicol. Baixa frequência de amostras multirresistentes às drogas antimicrobianas foi observada na população estudada.

Evaluation of a simplified key for the identification of coagulase-positive Staphylococcus isolated from bovine mastitis / Avaliação de uma chave de identificação simplificada para Staphylococcus coagulase-positivos isolados de mastite bovina

Evaluation of a simplified key for the identification of coagulase-positive Staphylococcus isolated from bovine mastitis. Three hundred fourty four strains of coagulase-positive Staphylococcus (CPS), isolated from mastitis cases, underwent phenotypic and genotypic tests to evaluate the efficiency of a simplified key, based on phenotypic tests for the discrimination of these microorganisms. The tests consisted of amplification of the femA gene and hemolysis in blood agar, production of acetoin and fermentation of maltose, mannitol and trehalose. Strains that showed negative results in the amplification test of the femA gene or that were not identified as Staphylococcus aureus (S. aureus) by phenotypic tests were tested with the APISTAPH kit (Biomériux-France), for precise identification of species. Phenotypic tests revealed 338 strains (98.25%) as S. aureus, three strains (0.86%) as Staphylococcus hyicus, and three microorganisms (0.86%) as Staphylococcus intermedius. PCR demonstrated that 338 (98.25%) strains belonged to the S. aureus species, confirming the results for 336 strains from 338 identified, through a simplified phenotypic key. A high rate of correlation (98.83%) was verifeid between the results of genotypic and phenotypic tests for the identification of S. aureus, demonstrating the applicability of the proposed key, for the discrimination of this microorganism in CPS isolated from bovine mastitis.

Visando testar a eficiência de uma chave simplificada baseada em testes fenotípicos para a discriminação de Staphylocococcus coagulase positivos (SCP) isolados de infecções intramamárias de bovinos, 344 amostras destes microrganismos foram submetidas a testes fenotípicos e genotípicos. Estes consistiram na amplificação do gene femA, na observação de hemólise em ágar sangue, produção de acetoína e fermentação de maltose, manitol e trealose. Amostras que apresentaram resultado negativo na amplificação do gene femA ou que foram identificadas com não Staphylococcus aureus (S. aureus) por meio dos testes fenotípicos foram submetidas ao kit APISTAPH (Biomériux-França) para identificação mais precisa. Os testes fenotípicos utilizados na chave simplificada permitiram identificar 338 amostras (98,25%) como S. aureus, três amostras (0,86%) como Staphylococcus hyicus e três (0,86%) como Staphylococcus intermedius. Por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR) 338 (98,25%) amostras foram identificadas como S. aureus, ratificando os resultados para 336 das 338 amostras identificadas por meio da chave fenotípica simplificada. Observou-se elevada concordância (98,83%) entre os resultados dos testes genotípicos e fenotípicos para a identificação de S. aureus, demonstrando a aplicabilidade da chave de identificação proposta para a discriminação deste microrganismo entre SCP isolados de casos de mastite bovina.

Mastite por leveduras em bovinos leiteiros do Sul do Estado de Minas Gerais, Brasil / Mastitis caused by yeasts in dairy herds in the South of the Minas Gerais State, Brazil

O objetivo deste trabalho foi estudar a freqüência de infecções intramamárias ocasionadas por leveduras a partir de amostras de leite (n=1710) coletadas em 40 rebanhos leiteiros do Estado de Minas Gerais. Cinqüenta e seis estirpes de leveduras do gênero Candida e uma linhagem de Trichosporon loubieri foram isoladas. Candida albicans foi a espécie dominante (28,1 por cento das cepas), seguida por Candida parapsilosis (19,3 por cento), Candida catenulata (14,0 por cento), Candida glabrata (14,0 por cento) e Candida tropicalis (8,8 por cento). Infecções mistas foram detectadas em 29,8 por cento das vacas levedura-positivas. Amostras positivas para leveduras foram predominantemente obtidas (84 por cento) de vacas com mastite subclínica. A baixa taxa de isolamento de leveduras sugere que estes microrganismos não são relevantes para mastite bovina na região estudada.

The objective of this study was to report the frequency of intramammary infections by yeasts, in Minas Gerais State, from milk samples (n = 1710) collected in 40 dairy herds. Fifty six yeast strains of the genus Candida and one strain of Trichosporon loubieri were isolated. Candida albicans was the dominant species (28.1 percent of the strains), followed by Candida parapsilosis (19.3 percent), Candida catenulata (14.0 percent), Candida glabrata (14.0 percent), Candida tropicalis (8.8 percent). Mixed infections were detected in 29.8 percent of yeast-positive cows. The yeast infection was more frequent (84 percent) in cows with subclinical mastitis. The low rate of isolation of yeasts suggests that these microorganisms are not relevant to bovine mastitis in the studied region.